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酶聯免疫的原則

日期:2022-06-24 18:28
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摘要:
 
酶聯免疫其具有特異、靈敏、簡便、快速的特點,現已在生物醫學研究領域及臨床疾病的診療中得到了廣泛的應用。
EIA本身是以酶[辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)等]作標記物的,因此,EIA的測定放大始終是圍繞著標記酶來作文章的,不外乎三種可能的方式:①增加標記酶的量;②非顯色底物的應用;③附加一個受標記酶催化的反應系統。

一、增加標記酶的量
通過生物素/親合素—酶或酶/抗酶復合物的間接方法,可以增加ELISA測定中*后所測定的標記酶的量。這種方法雖在一定程度上由于標記酶的聚集增加了EIA的測定敏感性,但同時有增加非特異的背景顯色的可能。

二、非顯色底物的應用
從酶的反應底物著手,使用具有高測定敏感性的非顯色底物如熒光素或發光物,從而提高EIA的測定敏感性,這種方法的優點是不需額外的步驟及試劑制備,缺點是需要特殊的測定儀器。

三、附加一個受標記酶催化的反應系統
原始標記酶催化附加一個反應系統,如酶底物反應循環或酶級聯反應,從而達到反應放大的目的。這種由數個催化反應的耦聯而構建的放大系統,是酶放大的根本之所在,敏感性的提高來源于真正的信號放大,而不是簡單地將一個分子轉變為更多的易于測定的分子。一個適用的酶放大系統的選擇除了要考慮生化因素外,重要的是酶及其底物的穩定性,并要易于獲得,因其對試驗的準確性和重復性有較大的影響。




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